GM12878 人B淋巴細(xì)胞特點(diǎn)和應(yīng)用 凍存條件 培養(yǎng)條件

基本信息

• 來源：GM12878細(xì)胞系源自一位白人女性的外周血B淋巴細(xì)胞，通過Epstein-Barr病毒（EBV）轉(zhuǎn)化獲得。
• 細(xì)胞形態(tài)：淋巴母細(xì)胞樣，呈懸浮生長。
• 培養(yǎng)條件：通常使用RPMI-1640培養(yǎng)基，添加10%胎牛血清和1%青霉素/鏈霉素（P/S），在37℃、5% CO?的條件下培養(yǎng)。
• 傳代比例：建議1:2至1:4傳代。
• 凍存條件：60%培養(yǎng)基、30%胎牛血清、10% DMSO，液氮保存。
• 生物安全等級(jí)：BSL-1。

特性

• GM12878細(xì)胞的CYP2C19基因存在一個(gè)堿基突變（G→A），導(dǎo)致異常剪接位點(diǎn)的出現(xiàn)，使得該基因的5號(hào)外顯子發(fā)生40 bp缺失，最終導(dǎo)致截短的CYP2C19蛋白失去催化活性。
• 該細(xì)胞系支原體檢測為陰性，無菌操作。

應(yīng)用

• 基因組學(xué)：用于研究人類基因組的結(jié)構(gòu)和功能。
• 表觀遺傳學(xué)：研究基因表達(dá)調(diào)控的表觀遺傳機(jī)制。
• 免疫學(xué)：研究B淋巴細(xì)胞的功能和免疫反應(yīng)。

注意事項(xiàng)

• 該細(xì)胞系為懸浮細(xì)胞，傳代時(shí)建議使用半換液法，避免直接倒掉細(xì)胞培養(yǎng)液。
• 收到細(xì)胞后需進(jìn)行無菌操作，第一次傳代建議1:2傳代。
• 僅限于科學(xué)研究，不可用于動(dòng)物或人類疾病的治療。

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??《細(xì)胞平臺(tái)簡介》
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??細(xì)胞常規(guī)說明:
??培養(yǎng)條件:89%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+10%FBS+1%雙抗
??凍存液成分:10%DMSO+40%FBS+50%基礎(chǔ)培養(yǎng)液
??細(xì)胞質(zhì)檢情況:不含細(xì)菌、真菌、支原體等微生物污染
??傳代建議:1:2~1:3傳代,2~3天換液1次
??特別提醒:簽收細(xì)胞后,如細(xì)胞狀態(tài)不佳,或培養(yǎng)中遇到問題,煩請(qǐng)當(dāng)天盡快聯(lián)系,以便處理。當(dāng)天及時(shí)反饋細(xì)胞情況和細(xì)胞照片是售后跟蹤處理重要的參考依據(jù),請(qǐng)務(wù)必重視。
??懸浮細(xì)胞接收后的操作流程與注意事項(xiàng)
??1.如簽收時(shí)出現(xiàn)培養(yǎng)瓶壁破裂,漏液等情況請(qǐng)及時(shí)做好照片記錄并聯(lián)系實(shí)驗(yàn)室
??2.擰松瓶蓋,細(xì)胞瓶豎立培養(yǎng)8h(或過夜)
??3.待細(xì)胞沉底后吸除上層液體(含碎片殘?jiān)?請(qǐng)小心操作),然后吸取沉底的細(xì)胞層(2ML左右轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)瓶,加入新鮮的完(全)培養(yǎng)基(如細(xì)胞狀態(tài)較差可將血清濃度調(diào)高到15%)繼續(xù)培養(yǎng)
??懸浮細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程(請(qǐng)嚴(yán)格遵照無菌操作)
??1.將培養(yǎng)瓶/皿中的細(xì)胞重懸混勻
??2.吸取2/3或者一半混勻后的細(xì)胞懸液到新的培養(yǎng)瓶/皿
??3.分別在原瓶/皿和新分瓶的培養(yǎng)瓶/皿加入等量或者2倍的新鮮培養(yǎng)基,使細(xì)胞密度保持在5 X10(5) /ml左右
??4.注意培養(yǎng)基PH值變化情況和細(xì)胞密度,定期半量換液(每周2-3次),待細(xì)胞密度大于2 X 10(6) /ml以后重復(fù)1項(xiàng)操作或者凍存
??貼壁細(xì)胞接收后的操作流程與注意事項(xiàng)
??1.收到細(xì)胞當(dāng)天盡快更換新鮮完(全)培養(yǎng)基,第二天再進(jìn)行消化處理
??2.如果細(xì)胞收到時(shí)呈懸浮或者部分懸浮的狀態(tài),請(qǐng)將懸浮的細(xì)胞即時(shí)離心,加15%血清的完(全)培養(yǎng)基到新的培養(yǎng)皿/瓶繼續(xù)培養(yǎng)觀察。同時(shí)原培養(yǎng)瓶中剩下的貼壁細(xì)胞更換為15%血清的完(全)培養(yǎng)基,培養(yǎng)觀察
??3.若出現(xiàn)生長不均:貼壁細(xì)胞若出現(xiàn)分布不均,成島狀生長,可將細(xì)胞進(jìn)行消化,重懸打散細(xì)胞,加入新鮮培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)
??貼壁細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程(請(qǐng)嚴(yán)格遵照無菌操作)
??1.吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,PBS緩沖液潤洗細(xì)胞兩次,加適量0.25%胰(酶)進(jìn)行消化細(xì)胞(注意把握消化時(shí)間)
??2.鏡下觀察消化情況,在細(xì)胞邊緣縮小,貼壁松動(dòng)時(shí)(不建議消化到細(xì)胞漂浮)去掉胰(酶),加6~8ml 完(全)培養(yǎng)基,輕輕吹打細(xì)胞層,盡量把細(xì)胞層吹落,吹散
??3.取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中,添加適當(dāng)?shù)耐?全)培養(yǎng)基,把細(xì)胞懸液打勻,于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)
??4.注意培養(yǎng)基PH值變化情況,定期換液(每周2-3次),待細(xì)胞密度達(dá)到80%以后重復(fù)17項(xiàng)作或者凍存

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